Anti-CW (Anti-RH8)
(Моноклональный)
ЦЕЛЕВОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ
Моноклональное агглютинирование Анти-Cw - реагента производятся из культуры клеток супернатантов гетерогибридомы-клеточных линий. Клетки, секретирующие антитела иммуноглобулин класса М, вступающие в специфическую реакцию с соответствующим антигеном. Антителом является человеческий белок. Реагенты используются для определения, обладают ли эритроциты соответствующими антигенами групп крови. Реагент предназначен для использования только квалифицированным и техническим персоналом.
ПРИНЦИП ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ДЕЙСТВИЙ
Процедуры, с использованием этого реагента основаны на принципе агглютинации.
Нормальные эритроциты человека, обладающие соответствующим антигеном, будут соединяться при наличии специфического антитела с антигеном.
РЕАГЕНТ
Перечисленные реагенты выделяются следующим клеточным клоном:
Anti-Cw при агглютинировании (моноклональные, человеческие иммуноглобулин класса М, клон MS-110)
Данный реагент содержит <0,1% (вес / объем) азида натрия в качестве консерванта. Дополнительно реагент получают из активных антител, хлорида натрия, макромолекул и бычьего альбумина.
ВНИМАНИЕ
Данный реагент получен из супернатантов клеточных культур. Тем не менее, в роли биопрепарата его следует рассматривать как потенциально инфекционный из-за существования опасности через возбудителей заболевания. Реагент содержит азид натрия, который может быть токсичным и может вступать в реакцию со свинцом или медью для образования взрывоопасных солей. При утилизации, промойте большим количеством воды. В силу этих причин с реагентами необходимо обращаться при надлежащем уходе.
ТРЕБОВАНИЯ ПО ХРАНЕНИЮ
Продукты в открытом и закрытом состоянии следует хранить при температуре от + 2 до + 8°C. Тогда как при использовании от + 15 до +30 °C. Необходимо хранить и использовать реагенты только до указанного срока годности.
ПРИМЕЧАНИЯ
- Дозировка положительных реакций также зависит от возраста, используемой крови.
- При каждом положительном и отрицательном тестировании, должна быть выполнена проверка.
- Неправильное хранение ухудшает эффективность реагента.
- Центрифугирование сильно отличается от определенной относительной центробежной силы, что может привести к неправильным результатам.
- Образцы крови для испытания должны быть использованы как можно скорее. Если возникает задержка в тестировании, то образцы должны храниться при температуре от 2 до 8 ° C. Кровь втягивается в цитрат натрия или ЭДТА и должна быть проверена в течение 14 дней. Кровь, забираемая из пальца может быть проверена непосредственно с помощью метода с использованием стекла, но, чтобы избежать свертываемости, кровь собранную таким образом необходимо быстро смешивать с реагентом.
- Процедуры, определенные ниже, предназначены только для ручного тестирования. При использовании автоматических или полуавтоматических инструментов, следуйте указаниям, которые содержатся в руководстве по эксплуатации, предоставляемом с устройством от производителя. Лаборатории должны следовать утвержденным процедурам проверки, чтобы продемонстрировать совместимость этого продукта на автоматизированных системах.
- В целях использования этого реагента, все действующие национальные законы, директивы и норы, должны соблюдаться, особенно в Германии „Richtlinien zur Gewinnung von Blut und Blutbestandteilen und zur Anwendung von Blutprodukten (Hämotherapie)“.
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТА
Подготовки реагента не требуется. Используйте реагент непосредственно из флакона.
ПОРЯДОК ДЕЙСТВИЯ
Не предоставленный материал, дополнительно необходим при методе с использованием стекла
- Предметное стекло
- Пипетка Пастера
- Палочка для смешивания
Метод центрифугирования трубки
Пробирки, 10 x 75 мм или 12 x 75 мм
- Пипетки предназначены для подачи около 100 мкл
- Центрифуга
- Изотонический раствор; (с 0,85 - 0,9% хлорида натрия)
Метод испытания Метод с использованием стекла
- Используйте только осадок эритроцитов или цельную кровь.
- Поместите одну каплю (приблизительно 50 мкл) соответствующего реагента на предметное стекло.
- С помощью пипетки Пастера добавьте одну каплю осадка эритроцитов или цельной крови (приблизительно 50 мкл) на предметное стекло.
- Хорошо смешайте эритроциты с реагентом палочкой и распределите по окружности (диаметр 2 см)
- Слегка вращая стекло, проверьте склеивание в течение 1 минуты (реакция начинается в течение нескольких секунд). Могут появляться неспецифические реакции из-за высыхания реактивного образования или, если стекло нагрето.
Метод центрифугирования трубки
- Используйте суспензию только от 2 до 5% эритроцитов в изотоническом растворе (клетки промываются от одного до трех раз изотоническим солевым раствором).
- Добавить 100 мкл (альтернативный подход: одна капля = приблизительно 50 мкл) реагента в каждую пробирку.
- Добавить 100 мкл (альтернативный подход: одна капля = примерно 50 мкл) соответствующей взвеси отмытых клеток в каждую пробирку.
- Тщательно перемешать, слегка встряхивая.
- Выдержать пробирку при комнатной температуре (от +15 до +30 °C) в течение 15 мин.
- Центрифугирование пробирки должно проходить в течение 1 мин при 2,000 оборотов в минуту (приблизительно 800-1,000 г).
- Аккуратно ресуспендируйте эритроциты и проверьте макроскопически для склеивания в течение 3 минут. Запишите результат.
ТРАКТОВКА АНАЛИЗА
«Немного вращайте/встряхивайте» при методе с использованием стекла и при методе центрифугирования пробирки:
Положительные результаты (+): видимые агглютинации эритроцитов означают положительный результат и свидетельствуют
о наличии соответствующего антигена. Отрицательные результаты (-): отсутствие видимого склеивания эритроцитов представляют отрицательный результат и показывают отсутствие соответствующего антигена.
ОГРАНИЧЕНИЯ ПОРЯДКА ДЕЙСТВИЙ
Неточности при соответствии инструкциям, которые написаны в соответствии с разделом «Последовательность действий» и «Толкование результатов» могут приводить к неправильным результатам.
Не получится достичь обоснованного вывода в отношении результата теста, если будет проходить профилактика с неопределенными или ложными результатами.
Фермент, при проведении лечения эритроцитами может реагировать в неспецифической форме.
Благодаря изменчивости экспрессии антигенов, реакционная способность этих реагентов против определенных фенотипов может дать более слабую реактивность по сравнению с контрольными клетками.
Эритроциты, покрытые аллоантителами или аутоантителами такой же или подобной специфичности в качестве реагента (т.е. клетки, которые являются положительными в прямом антиглобулиновом тесте (ПАТ)) могут показать слабые реакции. В редких случаях могут произойти ложно-отрицательные результаты.