Анти-K (KEL1)
агглютинирующий, моноклональный человеческий иммуноглобулин класса М
Моноклональное агглютинирование Анти-К (KEL1) - реагентов производится из культуры клеток культуры супернатантов гетерогибридомы-клеточных линий. Клетки, секретирующие антитела иммуноглобулин класса М, вступающие в специфическую реакцию с соответствующим антигеном. Антителом является человеческий белок. Реагенты используются для определения, обладают ли эритроциты соответствующим антигеном K (KEL1) групп крови. Реагенты предназначены для использования только квалифицированным и техническим персоналом.
ПРИНЦИП ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ДЕЙСТВИЙ
Процедуры, с использованием этих реагентов основаны на принципе агглютинации. Нормальные эритроциты человека, обладающие соответствующим антигеном будут агглютинировать в присутствии специфического антитела, направленного к антигену.
РЕАГЕНТЫ
Перечисленные реагенты содержат антитела следующих клеточных клонов:
Анти-K (KEL1) агглютинирование (моноклональные, человеческий иммуноглобулин класса М, клон: MS-56)
Анти-K (KEL1) агглютинирование (моноклональные, человеческий иммуноглобулин класса М, клон: AEK-4)
Реагент содержит <0,1% (вес / объем) азида натрия в качестве консерванта. Дополнительно
реагенты получают из активных антител, хлорида натрия, макромолекул
и бычьего альбумина.
ВНИМАНИЕ
Эти реагенты были подготовлены из супернатантов клеточных культур. Тем не менее, в роли биопрепарата их следует рассматривать как потенциально инфекционные из-за существования опасности через возбудителей заболевания. Реагенты содержат азид натрия, который может быть токсичным и может вступать в реакцию со свинцом или медью для образования взрывоопасных солей. При утилизации, промойте большим количеством воды. С реагентами необходимо обращаться с должной осторожностью по причинам упомянутым выше.
ТРЕБОВАНИЯ ПО ХРАНЕНИЮ
Продукты в открытом и закрытом состоянии следует хранить при температуре от + 2 до + 8°C. Тогда как при использовании от + 15 до + 30°С. Необходимо хранить и использовать реагенты только до указанного срока годности.
ПРИМЕЧАНИЯ
- Дозировка положительных реакций также зависит от возраста, используемой крови.
- При каждом положительном и отрицательном тестировании, должна быть выполнена проверка.
- Неправильное хранение ухудшает эффективность реагента.
- Центрифугирование сильно отличается от определенной относительной центробежной силы, что может привести к неправильным результатам.
- Образцы крови для испытания должны быть использованы как можно скорее. Если возникает задержка в тестировании, то образцы должны храниться при температуре от 2 до 8°C. Кровь втягивается в цитрат натрия или ЭДТА и должна быть проверена в течение 14 дней.
- Процедуры, определенные ниже, предназначены только для ручного тестирования. При использовании автоматических или полуавтоматических инструментов, следуйте указаниям, которые содержатся в руководстве по эксплуатации, предоставляемом с устройством от производителя. Лаборатории должны следовать утвержденным процедурам проверки, чтобы продемонстрировать совместимость этого продукта на автоматизированных системах.
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТА
Подготовка реагентов не требуется. Используйте реагенты непосредственно из флаконов. ПОРЯДОК ДЕЙСТВИЯ
Не требуется дополнительного материала
Предметный метод: Предметное стекло; пипетка Пастера; тест-полоска для смешивания При Методе центрифугирования пробирки: пробирки 10 х 75 мм или 12 х 75 мм; микролитровые пипетки; центрифуга; изотонический раствор (0,85 - 0,9% хлорид натрия)
Порядок испытания
Метод с использованием стекла (использовать только с клоном: MS-56)
- Используйте только осадок эритроцитов или цельную кровь.
- Поместите одну каплю (приблизительно 50 мкл) соответствующего реагента на предметное стекло.
- С помощью пипетки Пастера добавьте одну каплю осадка эритроцитов или цельной крови (приблизительно 50 мкл) на предметное стекло.
- Смешайте тщательно эритроциты с реагентом палочкой и распределите по окружности (диаметр 2 см)
- Слегка вращая стекло, проверьте склеивание в течение 1 минуты (реакция начинается в течение нескольких секунд). Могут появляться неспецифические реакции из-за высыхания реактивного образования или, если стекло нагрето. Запишите результат.
Метод центрифугирования пробирки
- Используйте суспензию только от 2 до 5% эритроцитов в изотоническом растворе (клетки промываются от одного до трех раз изотоническим солевым раствором).
- Добавить 100 мкл (альтернативный подход: одна капля = приблизительно 50 мкл) соответствующей клеточной суспензии в каждую пробирку.
- Добавить 100 мкл (альтернативный подход: одна капля = примерно 50 мкл) соответствующей взвеси отмытых клеток в каждую пробирку.
- Тщательно перемешать, слегка встряхивая.
- Выдержать пробирку при комнатной температуре (от +15 до +30 °C) в течение 15 мин.
- Центрифугирование пробирки должно проходить в течение 1 мин при 2,000 оборотов в минуту (приблизительно 800-1,000 г).
- Аккуратно ресуспендируйте эритроциты и проверьте макроскопически для склеивания в течение 3 минут. Запишите результат.
ТРАКТОВКА АНАЛИЗА
«Немного вращайте/встряхивайте» при методе с использованием стекла и при методе центрифугирования пробирки:
Положительные результаты (+): видимые агглютинации эритроцитов означают положительный результат и свидетельствуют о присутствии соответствующего антигена. Отрицательные результаты (-): отсутствие видимого склеивания эритроцитов представляет отрицательный результат и показывает отсутствие соответствующего антигена.
ОГРАНИЧЕНИЯ ПОРЯДКА ДЕЙСТВИЙ
- Неточности при соответствии инструкциям, которые написаны в соответствии с разделом «Последовательность действий» и «Толкование результатов» могут приводить к неправильным результатам.
- Не получится достичь обоснованного вывода в отношении результата теста, если будет проходить профилактика с неопределенными или ложными результатами.
- Фермент, при проведении лечения эритроцитами может реагировать в неспецифической форме.
- Благодаря изменчивости экспрессии антигенов, реакционная способность этих реагентов против определенных фенотипов может дать более слабую реактивность по сравнению с контрольными клетками.
- Эритроциты, покрытые аллоантителами или аутоантителами такой же или подобной специфичности в качестве реагента (т.е. клетки, которые являются положительными в прямом антиглобулиновом тесте (ПАТ)) могут показать слабые реакции. В редких случаях могут произойти ложноотрицательные результаты указаниям, которые содержатся в руководстве по эксплуатации, предоставляемом с устройством от производителя. Лаборатории должны следовать утвержденным процедурам проверки, чтобы продемонстрировать совместимость этого продукта на автоматизированных системах.